SOP文件乙型肝炎核心抗体ELIS

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目的：规范HbcAb检测的操作范围：检验科免疫实验室责任人：免疫实验室专业组长和实验室工作人员应用仪器：酶标仪检测原理：抗—HBc检测为竞争抑制法。即将纯化乙肝核心抗原（HBcAg）结合于固相载体上，然后加入待测标本和酶标记特异性抗体（HbcAb—HRP）。受检标本中含有抗—HBc，则由于抗—HBc与固相载体上HccAg结合，竞争性地占去了酶抗—HBc与固相载体上HBcAg结合的机会，使酶标抗—HBc与固相载体上HBcAg结合量减少。加底物显色后的颜色越浅，反之则颜色越深。试剂品牌：速显乙型肝炎病毒核心抗体诊断试剂盒。标本收集：1、最好使用新鲜血清样本，如需保存，可置-8℃冷藏48小时或-0℃冷冻4周。、避免使用溶血、浑浊或脂血样本及反复冻融样本。试剂盒组成：1、HBeAb微孔板、HBeAb酶标记抗体3、HBeAb阳性对照血清4、HBeAb阴性对照血清5、浓缩洗涤液6、底物A7、底物B8、终止液（MHSO4）9、封口膜10、自封袋操作步骤：1、准备样品：血清（血浆）用稀释后洗液作1：30稀释（检测结果为临床意义）；血清（血浆）原倍加样（检测结果为流行病学意义）。、加样：将预包被板条固定于板架上。每次试验设阴性对照孔、阳性对照孔，分别加入阴、阳性对照50ul（1滴）；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品（1：30稀释后或原倍）50ul.3、加酶：空白对照孔不加酶，其余孔加入酶标记物50ul（1滴）。4、温育：振荡混匀，置37oC温育30分钟。5、洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液，扣干。重复洗6次。6、显色：每孔加入底物缓冲液ul（1滴），再加入底物液50ul（1滴），振荡混匀，置37oC温育15分钟。结果判定：1、目测法：在白色背景下观察各孔颜色，蓝色为阴性；无色或淡蓝色为阳性。、比色法：每孔加入终止液50ul（1滴），轻拍混匀。在单波长nm下，用空白孔校零，再读取各孔OD值。临界值（C.O.）计算：样品为1：30稀释血清时，临界值（C.O.）=阴性对照平均OD值×0.4样品为原倍血清时，临界值（C.O.）=阴性对照平均OD值×0.结果：样品OD值＜临界值（C.O.）为Anti-HBc阳性样品OD值≥临界值（C.O.）为Anti-HBc阴性注意事项：1、从冷藏环境中取出的试剂盒应平衡至室温后方可使用。、用的预包被板条应置于封口袋，~8oC保存。3、若0倍浓缩洗液出现结晶，请放置37oC至溶解。4、滴加试剂时，应先摇匀，并弃去1~滴后，垂直滴加。5、洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口有游离酶不能洗净。6、结果判读请在15分钟内完成。7、不同批号的试剂组份不可混用。8、试剂盒应按含有传染性材料对待。参考范围：阴性临床意义：血清中乙肝病毒颗粒经去垢剂处理后，可使之释放出内部成分，称为HBcAg.其相应的抗体称为抗-HBc。外周血中没有游离的HBcAg，只存在肝细胞核中。所以HBcAg（+）常表示有乙肝病毒颗粒存在，有传染性。HBcAg阳性预后差。阴性预后好。抗-HBc是反映HBV感染流行水平的指标，是乙肝病毒核心抗原的总抗体。其意义：（1）急性乙肝在HBsAg出现后，在谷丙转氨酶（ALT）高峰时，可在血清中测出抗-HBc，最早出现的是抗-HBcIgM，这是乙肝病毒急性或近期感染的重要标志。慢性肝炎活动期也常呈阳性反应。约6-1个月后，由抗-HBcIgG取而代之，可持续多年不消退。抗-HBcIgM和IgG都持续存在，则往往出现慢性化过程；（）各种类型的慢性HBsAg携带者，在血清中可检出高滴度的抗-HBc；（3）单项抗-HBc的意义仍未完全明确。可能是既往感染的标志；HBsAg消失而抗-HBs尚未出现的所谓"空窗期"；抗－HBc被动转移：输用抗-HBc阳性的血液制品，注射由HBV感染后出现免疫反应者的血液制备的乙肝免疫球蛋白，均可呈现单项抗-HBc阳性。若抗-HBc阳性，血液可能仍有传染性。

见附表：“常见乙型肝炎标志物五项检测结果与临床意义”

序号

HBsAg

HBsAb

HBcAb

HBeAg

HBeAb

临床意义

1

－

－

－

－

－

过去和现在未感染过HBV。

－

－

+

－

－

(1)既往感染未能测出抗-HBs；

()恢复期HBsAg已消，抗-HBs尚未出现；

(3)无症状HBsAg携带着。

3

－

－

+

－

+

(1)既往感染过HBV；

()急性HBV感染恢复期；

(3)少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs出现前的窗口期。

4

－

+

－

－

－

(1)注射过乙肝苗有免疫；

()既往感染；③假阳性

5

－

+

+

－

+

急性HBV感后康复。

6

+

－

+

－

－

(1)急性HBV感染；

()慢性HBsAg携带者；

(3)传染性弱。

7

－

+

+

－

－

既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。

8

+

－

+

－

+

(1)急性HBV感染趋向恢复；

()慢性HBsAg携带者；

(3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。

9

+

－

+

+

－

急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。即俗称的“大三阳”。

10

+

－

－

－

－

(1)急性HBV感染早期,急性感染潜伏期；

()慢性HBV携带者，传染性弱。

11

+

－

－

－

+

(1)慢性HBsAg携带者易转阴；

()急性HBV感染趋向恢复。

1

+

－

－

+

－

急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。

13

+

－

+

+

+

(1)急性HBV感染趋向恢复；

()慢性携带者。

14

+

+

－

－

－

(1)亚临床型HBV感染早期；

()不同亚型HBV二次感染。

15

+

+

+

－

－

(1)亚临床型HBV感染早期；

()不同亚型HBV二次感染。

16

+

+

-

－

+

亚临床型或非典型性感染。

17

+

+

+

－

+

亚临床型或非典型性感染。

18

+

+

+

+

－

亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染。

19

－

－

－

+

－

(1)非典型性急性感染；

()见于抗-HBc出现之前的感染早期，HBsAg滴度低而呈阴性，或呈假阳性。

0

－

－

+

+

－

非典型性急性感染。

1

－

－

+

+

+

急性HBV感染中期。

－

+

－

－

+

HBV感染后已恢复。

3

－

+

－

+

－

非典型性或亚临床型HBV感染。

4

－

+

+

+

－

非典型性或亚临床型HBV感染。

5

－

－

－

－

+

急性HBV感染趋向恢复。

6

+

+

+

+

+

①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见）；

②血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见）。

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